細(xì)胞ELISA試劑盒免疫測(cè)定的目的

　　細(xì)胞ELISA試劑盒即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。Engvall 和Perlmann于1971年應(yīng)用該法進(jìn)行了IgG定量測(cè)定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。

　　細(xì)胞ELISA試劑盒免疫測(cè)定的目的：

　　1.測(cè)定體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等；

　　2.測(cè)定激素，包括小分子量的甾體激素等；

　　3.測(cè)定抗生素和藥物；

　　4.測(cè)定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；

　　5.利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等；

　　ELISA的基本原理

　?、偈箍乖ɑ蚩贵w）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

　　②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原（或抗體），而且此酶標(biāo)抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

　?、蹨y(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本（抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開，后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量。

　　細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在中 除正常反應(yīng)外，有時(shí)?？梢姷揭恍╁e(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。

　　細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

　　1.包被；

　　2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)；

　　3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

　　4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；

　　5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml；

　　6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。

　　血清是ELISA標(biāo)本，血漿一般可視為與血清同等的標(biāo)本，標(biāo)本引起的假陽性和假陰性結(jié)果主要是干擾性物質(zhì)所致，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種。